В отличие от капельной диагностики реакции иммунодиффузии протекают в агаровом геле. Эти методы наиболее удобны для диагностики вирусов со сферической формой, легко диффундирующих в агаре а также для идентификации штаммов вирусов. В случае палочковидных или нитевидных вирусов применяют их разрушение путем физических воздействий (например – ультразвуком) или химическим путем с использованием 2,5 %-ного пирролидина 1 %-ного додецилсульфата натрия и др. При этом сыворотку также получают к продуктам деградация вируса. Наиболее распространен метод двойной иммунодиффузии в геле по Ухтерлони и метод радиальной иммунодиффузии. В первом случае расплавленный агар выливают на стекло. В геле вырезают лунки и заполняют их растворами антигенов и антител. При их диффузии в геле навстречу друг другу образуются видимые невооруженным глазом преципитации.

При радиальной иммунодиффузии в расплавленный и охлажденный агар до 48-50° добавляют антисыворотку и наносят равномерным слоем на стекло. Затем в геле вырезают лунки и заполняют их раствором антигена. Молекулы антигена радиально диффундируют из лунки и образуют в геле кольцо преципитации.

Чувствительность иммунодиффузионных тестов – 1 мкг вируса/ мл, то есть примерно в 100 раз выше чувствительности капельного метода.

Методы повышения чувствительности реакции агглютинации. Эти методы основаны на использовании сенсибилизированных инертных носителей антител. В присутствии антигена происходит агглютинация (склеивание) крупных инертных частиц и повышается отчетливость реакции.

В качестве инертных частиц – носителей антител используются эритроциты (реакция непрямой агглютинации), частицы латекса (метод агглютинации латекса), частицы латекса, покрытые протеином А золотистого стафилококка (PALLAS-тест), частицы бактерий золотистого стафилококка (АБВ-тест). Установлено, что белок А определенного штамма золотистого стафилококка обладает уникальной способностью присоединять антитела животных и, в частности, кроликов. Причем присоединение происходит в области F_c фрагмента lgG, в то время как F_ab-фрагмент иммуноглобулина остаются свободными для связывания с гомологичными антигенами.

Практически диагностика в этих случаях сводится к получению сенсибилизированных антителами инертных частиц. Например, в случае PALLAS-теста откалиброванные частицы латекса последовательно покрываются протеином А и антителами, в случае АБВ-теста антитела сорбируются на поверхности стафилококка. Затем капля приготовленного таким образом раствора смешивается с каплей сока растения, как это делается при обычной капельной агглютинации. Чувствительность таких методов достигает 50-400 нг вируса на 1 мл сока.

Для предотвращения неспецифической агглютинации стафилококка в случае АБВ-теста тpебуется достаточное разведение антисывороток (1:150-1:300).