Обычно этот метод применяют при размножении первых здоровых растений, выращенных из верхушечных меристем.
Размножать оздоровленные растения можно на агаризованной (твердой) среде в стерильных условиях или на жидкой среде с исключением органических соединений в нестерильных условиях.
После отрастания растений из верхушечных меристем до образования 5-8 листочков их в стерильном боксе пинцетом извлекают из пробирки и на простерилизованной чашке Петри острым скальпелем или лезвием безопасной бритвы разрезают на черенки, включающие часть стебля с одним листочком. На старой питательной среде можно оставить часть стебля с корневой системой для повторного отращивания. Черенки сажают в пробирки с питательной средой на глубину междоузлия.
Инструменты и чашку Петри стерилизуют перед черенкованием каждого растения. Выращивают растения из черенков при температуре 20-23°, относительной влажности 70-80 %, освещении люминисцентными лампами с силой света 3-4 тыс. люкс и 16-часовом светопериоде.
На 3-4 день после посадки у черепков начинается рост стебля и корней. Через 12-16 дней растения полностью отрастают и готовы для повторного черенкования.
Для выращивания растений из черенков можно использовать среду Мурасиге-Скуга в модификации ВНИИКХ. Среду готовят на бидис-тиллированной воде. Для массового приготовления сред используют не навески, а определенные объемы заранее приготовленных концентрированных маточных растворов компонентов.
Размножать растения в пробирках можно по упрощенной методике с исключением автоклавирования в обычном лабораторном помещении. Для этой цели используют жидкую питательную среду с минеральной основой по Мурасиге-Скугу или среду Кнопа и Хогленда, но не используют витамины, сахарозу, гидролизат казеина и агар, а добавляют регуляторы роста.
Из фильтровальной бумаги нарезают полоски длиной 8-10 см, шириной около 1 см. Сгибая полоски пополам, делают мостики с отверстием для черенка в центре сгиба. Мостики вставляют в тщательно вымытые кипяченой, а затем дистиллированной водой пробирки.
Черенки помешают в отверстие мостика в пробирке до пазухи листа. В пробирки из пипетки наливают питательную среду до уровня верхней части мостика так, чтобы пазушная почка черенка находилась несколько выше уровня среды.
Более простой способ использовал В.С.Резник. Нарезанные полоски фильтровальной бумаги, ширина которых примерно соответствует уровню жидкой питательной среды, в пробирке свертывают трубочкой и пинцетом погружают в среду. Черенок вставляют в центр трубочки. Сверху пробирку закрывают кусочком ваты.
Через 20-25 дней растения отрастают и становятся пригодными для повторного черенкования. Периодически, по мере уменьшения уровня среды в пробирке, ее нужно подливать. После того как из черенков получат нужное число растений в пробирках, их пересаживают в зимние или летние пленочно-марлевые теплицы с хорошо увлажненной питательной смесью.
С целью повышения продуктивности растений из микрочеренков после их высадки в теплицы применяют методику индуцирования столоно- и клубнеобразования in vitro. При этом рост растений из микрочеренков в пробирках осуществляют на питательной среде, содержащей 1-4 % сахарозы для ранних сортов и 6-10 % – для позднеспелых сортов, на 10-часовом фотопериоде. Затем растения на 2 недели переносят на 16-часовой фотопериод, после чего их высаживают в теплицы. При этом количество клубней на 1 растение увеличивается в среднем в 1,5-2 раза.
Применение метода черенкования растений в пробирках позволяет в течение 3-4 месяцев получить 2-3 тыс. растений, пригодных для пересадки в грунт, то есть за 8-10 месяцев от одного растения около 20 тыс. клубней.
Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!