Данная технология основана на добавлении в питательную среду при выращивании регенерантов веществ-ингибиторов вирусов. Во ВНИИ картофельного хозяйства впервые показана высокая эффективность применения при оздоровлении картофеля методом верхушечной меристемы панкреатической рибонуклеазы (РНК-азы).

Применяется РНК-аза для обработки ростков перед вычленением меристем либо путем добавления в питательную среду в концентрации 0,001-0,1 %.

Обработку ростков клубней РНК-зой проводили методом инфильтрации в вакуум-камере в течение 20 мин.

Добавление РНК-азы к основной питательной среде осуществляют двумя способами. В первом случае раствор РНК-азы стерилизуют фильтрацией через фильтр Зейтца. Затем раствор РНК-азы в стерильных условиях добавляют в колбу с автоклавированной питательной средой и после тщательного перемешивания разливают в пробирки. Во втором случае РНК-азу растворяли в стерильной воде, затем добавляли в теплую автоклавированную питательную среду, после чего разливали в стерильные пробирки в боксе.

Для уменьшения расхода РНК-азы пробирки со средой готовят таким образом, чтобы РНК-аза располагалась в верхнем слое. С этой целью готовят 1 л среды и 0,9 л разливают в пробирки, а в оставшиеся 100 мл добавляют РНК-азу в заданной концентрации. Затем и стерильных условиях в каждую пробирку добавляют охлажденную до 40° среду с РНК-азой так, чтобы она располагалась в верхнем слое (около 0,5 см).

Применение РНК-азы в концентрации 0,001-0,1 % оказывает стимулирующее действие на морфогенез меристем и выход регенерантов. При этом эффективность оздоровления существенно увеличивается. Приживаемость меристем па питательной среде Мурасиге-Скуга с РНК-азой повышалась в зависимости от сорта на 10-35 %, количество полученных регенерантов – на 30-40 %.

Процент здоровых регенерантов на питательной среде с РНК-азой был в 1,2-2,0 раза выше, чем в контроле (питательная среда без РНК-азы).

Аналогичным действием РНК-азы обладает созданная в СибИЦиГ бактериальная эндонуклеаза (БЭ), более доступная для использования в практической работе. Применяется из расчета 100000 Е на 100 мл среды. При этом к 100 мл среды с БЭ добавляют 0,5 мл 20 %-ного стерильного раствора сернокислого магния (100 мг сернокислого магния не 100 мл среды).