Степень зараженности почвы картофельными нематодами обусловлена количеством личинок, яиц, содержащихся во всех цистах, которые выделены из 100 см3 почвы. Наиболее просто количество личинок и яиц подсчитывают следующим образом. Цисты, выделенные из 100 см3 анализируемой пробы почвы, нужно собрать в каплю воды на конце предметного стекла. Для сбора удобно использовать скальпель. Эту каплю закрывают концом другого предметного стекла и цисты раздавливают между ними. Содержимое смывают со стекол в химический стакан, где уровень воды доводят до 100 мл. Взвесь личинок в стакане в течение 1-2 мин перемешивают продуванием через пипетку или гомогенизатором при скорости вращения мешалки 3-5 тыс. об./мин. В качестве гомогенизатора используют размельчитель РТ-1. Сразу же после продувания или, не прекращая перемешивания, из стакана отбирают мерной пипеткой четыре пробы (по 1 мл каждая), которые помещают в четыре ячейки счетной камеры. Подсчитав среднее количество личинок и яиц взвеси, находят их содержание в 100 мл. Таким образом, определяют содержание личинок в цистах, выделенных из 100 см3 анализируемой пробы почвы, то есть степень зараженности почвы.
Определение живых и мертвых личинок и яиц картофельных нематод. Для распознавания живых и мертвых личинок существуют разные методики. Наиболее простой метод – это визуальное распознавание погибших и живых личинок по форме тела и состоянию внутренних органов. Живая личинка золотистой картофельной нематоды имеет типичную червеобразную форму тела и ненарушенную структуру внутренних органов. У погибших личинок изломанная форма тела, внутренние органы их вакуолизированы с зернистой структурой. Такое же состояние у личинок, находящихся в яйцах.
Другой метод – это окрашивание нематод и последующее микроскопирование их с использованием люминесцентного или светового микроскопа. Для определения жизнеспособности фитонематод используют множество красителей, из которых 0,05 %-ный раствор малахитовой зелени применяется довольно часто. Для этого на предметное стекло в каплю воды помещают цисту, раздавливают ее препаровальной иглой и рядом с ней наносят каплю 0,05 %-ный раствора малахитовой зелени (50 мг на 100 мл дистиллированной воды). Затем иглой капли смешивают и оставляют на 5-10 мин. На одно стекло можно помещать отдельно одну от другой несколько капель воды с цистами, но при этом нужно нанести еще одну каплю воды без цисты, в которой после каждого раздавливания ополаскивают иглу и тщательно ее вытирают, чтобы предотвратить перенесение личинок из одной капли в другую.
После этого стекло устанавливают на предметный столик светового микроскопа и рассматривают каждую каплю в отдельности. Мертвые личинки окрашиваются интенсивно в голубовато-зеленый цвет, а живые не окрашиваются совсем или же окраска их значительно отличается от окраски мертвых по интенсивности.
Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!