Возбудители болезни, структура популяции.

Возбудители черной ножки и мокрой гнили клубней относятся к роду Pectobacterium. Наиболее часто болезнь вызывают виды Pect. phytophthorum и Pect. aroideae, Pect. carotovorum и Pect. carotovorum subsp. atrosepticum.

Выделение патогенов в чистую культуру.

Для выделения возбудителей черной ножки и мокрых бактериальных гнилей отобранные образцы тщательно промывают водопроводной водой, подсушивают, вырезают кусочки стеблей и клубней на границе здоровой и больной ткани, помещают на несколько секунд в 70% спирт и растирают в стерильной воде. Полученную суспензию стерильным шпателем наносят на поверхность 2%-го картофельного агара с добавлением 0,005 % 2,3,5-трифенилтетразолиумхлорид (ТТХ) в чашки Петри. Чашки выдерживают в термостате при температуре +25°С в течении 2-3 суток, после чего выросшие колонии пересевают в пробирки с картофельным агаром.

Оценка картофеля на устойчивость к черной ножке и мокрой гнили.

Для оценки селекционного материала картофеля на устойчивость к черной ножке используются разные методы. А.М.Лазарев (2001) определение устойчивости клубней рекомендует проводить с помощью специально изготовленных сверл (трубок) и прибора (шприца-бура) диаметром 15 мм, которыми вырезают из клубней цилиндры диаметром 15 мм. Затем эти столбики разрезают на диски толщиной 10 мм. Для инокуляции берут от каждого сорта по 40 кусочков. Заражение ломтиков проводят уколом препаровальной иглы, предварительно погруженной на 5 мин. в суспензию односуточной культуры смеси штаммов патогена плотностью 0,5х10⁹ клеток/мл на глубину 2-3 мм. Контрольные кусочки накалывают иглой, смоченной в стерильной воде. Степень поражения сорта картофеля оценивают через сутки (температура +25°С) путем измерения площади загнившей зоны на поверхности каждого диска и вычисления средней площади поражения образца. Сорта по устойчивости клубней распределяют на 5 групп:

0 баллов – абсолютно устойчивые (загнивание инфицированных кусочков отсутствует);

1 балл – повышенно устойчивые (площадь загнившей зоны до 10 мм²);

2 балла – относительно устойчивые (от 10,1 до 15 мм²);

3 балла – среднеустойчивые (15,1-25 мм²);

4 балла – неустойчивые (свыше 25 мм²).

Сорт считают сравнительно устойчивым при балловой оценке, равной 0-2. Для сравнения используют сорта картофеля, у которых заведомо известно, что они являются устойчивыми или неустойчивыми к патогену.

Определение устойчивости стеблей (по Шнейдеру, 1972). Заражение стеблей, срезанных в поле, проводят суспензией суточной культуры возбудителя черной ножки уколом шприца в среднюю их часть. Вводят 0,2 мл суспензии с концентрацией 10⁶ клеток/мл. Стебли срезают, начиная с фазы бутонизации до огрубения. Контролем служат стебли растений сортов с известной устойчивостью, Стебли размещают в сосудах с водой. Учет развития поражения проводят через 4 суток по шкале:

0 – отсутствие заражения (образец устойчивый);

1 – слабое заражение, незначительное увядание и пожелтение стеблей и листьев, загнивание стеблей отсутствует или очень слабое (образец слабопоражаемый);

2 – среднее поражение, стебли и листья увядают и желтеют в более сильной степени, слабое потемнение или загнивание в месте укола (образец среднепоражаемый);

3 – сильное поражение, стебли загнивают и изменяют окраску (образец сильнопоражаемый).

Полевой метод оценки. Метод основан на искусственном заражении клубней суспензией чистой культуры возбудителя с последующей высадкой их в поле. Водную суспензию патогена шприцом вводят в столонную часть клубней перед посадкой. Вводимый объем – 0,2 мл, концентрация суспензии – 10⁷ клеток/мл. Повторность – 20 клубней. Учитывают полевую всхожесть (фаза всходов), развитие черной ножки на ботве в период вегетации и поражение клубней в период уборки. Наиболее высокая достоверность оценки, осуществленной данным методом, наблюдается в годы с избыточным увлажнением.

Н.А.Дорожкиным и др. (1985) предложен метод оценки картофеля на устойчивость к черной ножке путем искусственного заражения целых клубней. Сущность метода сводится к следующему.

Промытые, обработанные спиртом и обожженные целые клубни картофеля механически повреждаются штампом на глубину 10 мм в пуповинной части. В полученные углубления пипеткой вводится 0,3 мл бактериальной суспензии 1-2-суточной культуры возбудителя болезни в концентрации 10 млн. бактериальных клеток в 1 мл стерильной дистиллированной воды. Для каждого образца берется 10 клубней. В контрольный образец с механическим повреждением вводится стерильная вода. Клубни укладываются в выстланные влажной фильтровальной бумагой эксикаторы, в нижнюю часть которых заливается стерильная вода. Эксикаторы накрывают крышкой или стеклом. Учет глубины и ширины зоны загнивания на разрезанных клубнях осуществляется на 8-10-й день. Рассчитывается индекс поражения по формуле (4).

В зависимости от индекса поражения оценка проводится по шкале:

0 – нет загнивания;

балл 1 – очень слабое заражение, индекс поражения до 2,0;

балл 2 – заражение слабое, индекс поражения 2,1-3,0;

балл 3 – заражение среднее, индекс поражения 3,1-5,0;

балл 4 – заражение сильное, индекс поражения 5,1-7,0;

балл 5 – заражение очень сильное, индекс поражения выше 7,1.

По полученным результатам устанавливаются группы поражаемости сортов и сеянцев картофеля:

абсолютно устойчивые – поражение отсутствует;

высокоустойчивые – балл 1;

относительно устойчивые – балл 2;

среднеустойчивые – балл 3;

восприимчивые – балл 4;

сильно восприимчивые – балл 5.

Такая шкала практически очень удобна, а в целях идентификации данных они легко могут быть переведены на 9-балльную оценку (таблица 9).

 

Таблица 9 – Используемые шкалы для оценки картофеля на устойчивость к бактериозам.

 

Степень устойчивости	5-балльная шкала, балл	9-балльная шкала
		балл	признаки поражения
Абсолютно устойчивый	0	9	Поражение отсутствует
Высокоустойчивый	1	8	Слабый некроз
Относительно устойчивый	2	7	Средний некроз
Среднеустойчивый		6	Сильный некроз
	3	5	Есть признаки мокрой гнили
		4	Зона загнивания ткани клубня до 30%
Восприимчивый	4	3	То же до 50%
		2	То же до 70%
Очень восприимчивый	5	1	То же свыше 70%