Проращивание ооспор, полученных на искусственных питательных средах.

 

Чашки с культурами, после образования ооспор и освещения помещают в холодильник при 5-8 °С на 1,5-3 мес. На протяжении этого времени ооспоры дозревают и способны прорастать.

Для оценки прорастаемости полученных ооспор вырезает агаровые блоки с ооспорами по всей зоне смыкания колоний А1 и А2 типов совместимости. Каждый агаровый блок с ооспорами суспендируют в микроразмельчителе тканей РТ-2 (или другого типа) с 10-25 мл дистиллированной воды в течение 40-50 сек. Полученную суспензию разливают в стерильные чашки Петри и помещают в морозильную камеру при температуре минус 10 °С на 18-24 ч, чтобы избавиться от мицелия и конидий гриба. Затем суспензию дважды протирают через металлическое сито с диаметром отверстий 44 мкм и дают отстояться в течение 20 мин. Надосадочную жидкость удаляют пипеткой, добавляют стерильную дистиллированную воду и полученную ооспоровую суспензию в стерильных чашках Петри инкубируют в темноте при 18-20 °С. Прорастание ооспор начинается на 3-5 день, и наблюдение за прорастанием продолжают в течение последующих 10-12 дней.

Проращивание ооспор, образовавшихся в растительных тканях.

 

Ооспоры, выделенные из растительной ткани, обладают очень низкой прорастаемостью. Для стимуляции прорастания применяют фурфурол, который оказывает также дезинфицирующее и антисептическое действие. Полученные, как описано выше, ооопоры суспендируют в 0,02 %-ном растворе фурфурола (разд. 8.2). Концентрация ооспор в суспензии не должна превышать 10³-10⁴ спор/мл. Для проращивания полученную ооспоровую суспензию разливают в стерильные чашка Петри или рассевают по 0,5-1 мл в чайки Петри на стерильный 1 %-ный водный агар с последующим распределением ее по всей поверхности агара. Чашки инкубируют при 18-20 °С в темноте. Через 3-5 суток инкубации чашки ежедневно в течение 10-12 суток просматривают под микроскопом и подсчитывают процент проросших ооспор.