Мировая коллекция ВИР в настоящее время насчитывает более 10 тыс. образцов различных видов и форм картофеля. Оценка устойчивости этих образцов картофеля к возбудителям бактериозов имеет большое значение для селекции.

В современной сельскохозяйственной бактериологии для определения устойчивости картофеля к возбудителям бактериальных гнилей применяются методы, основанные на искусственном инфицировании клубней (целых или их частей) чистыми культурами патогенов – Erwinia carotovora var. atroseptica – с последующей выдержкой материала во влажной камере. Известные в литературе способы не обеспечивают хорошей воспроизводимости результатов и требуют большой затраты времени и материала для испытаний /11, 7, 9, 10, 5/. Так, по методу Ю.И.Шнейдера /7, 9/ инфицирование картофеля проводят уколом препаровальной иглы, смоченной бактериальной суспензией, в мякоть ломтиков клубней. При каждом инфицировании необходимо обеспечивать наличие на игле определенной дозы суспензии, а укол должен производиться на одинаковую глубину. Метод трудоемок и не обеспечивает хорошей воспроизводимости результатов. Оценка устойчивости образца данным методом производится только на 3-4 сутки.

Предлагаемый в методических указаниях метод определения устойчивости клубней картофеля к возбудителям бактериальных гнилей, по сравнению с указанным способом, в 3-4 раза ускоряет определение устойчивости картофеля к бактериозу, примерно в 2 раза снижает трудоемкость исследований и дает более высокую воспроизводимость результатов.

Для инокуляций используют высоковирулентные штаммы микроорганизмов, которые можно получить из коллекции НИИКХ или Института микробиологии и вирусологии имени Д.К.Заболотного АН УССР. Бактерии выращивают в течение 1-2 суток на картофельном агаре и готовят суспензию смывом патогенов стерильной водой. Плотность суспензии – 100 млн. бактериальных тел в 1 мл. Она пригодна для заражения клубней только в день приготовления.

Для оценки устойчивости картофеля к возбудителю болезни отбирают 5-10 внешне здоровых среднего размера клубней от сорта (гибрида), отмывают их с помощью щетки под струей проточной воды. Затем клубни режут и проверяют на наличие внутренних изъянов. Клубни с любыми повреждениями и поражениями отбраковывают, заменяя их другими. Отобранный картофель после мойки подсушивают и стерилизуют 96%-м этиловым спиртом. Пробы берут с помощью бура с поршнем (длина бура 130 мм, внешний диаметр его 15 мм, диаметр поршня – 14 мм), вырезая цилиндры из ткани картофеля. Эти цилиндры разрезают скальпелем на диски высотой 10 мм. Для этой цели можно использовать 2 параллельно укрепленных на деревянных палочках лезвия. Из каждого образца приготавливают не менее 20-25 дисков, взвешивают на весах (например, ВЛК-500-М) с точностью до второго знака. При этом необходимо учитывать, что для эксперимента и контроля обязательно следует применять диски из одних и тех же клубней, так как они разнокачественны по своим свойствам. В противном случае в эксперимент могут попасть диски из одного клубня, а в контроль – из другого, вследствие чего их трудно будет сравнивать. Перед заражением при необходимости, чтобы диски не подсохли, их погружают в сосуд со стерильной водой, затем равномерно размещают по 5-10 штук в предварительно простерилизованные чашки Петри на увлажненную фильтровальную бумагу.

Инокуляцию картофеля проводят в комнате-боксе калиброванной или пастеровской пипеткой методом нанесения капли суспензии объемом 0,1 мл на каждый диск. В контроле на диски наносят капли стерильной воды. Если нет комнаты-бокса, то инфицирование проводят в специальном настольном боксе, который можно изготовить из оргстекла, установив в нем бактерицидную лампу для стерилизации. Также искусственное заражение картофеля можно проводить в специальных пылезащитных камерах отечественного производства (БП-4-004, КПГ-1М и др.). Затем чашки Петри с дисками из клубней помещают в термостат при температуре 25-27°С. Через сутки после инкубации в проточной воде на сите отмывают разложившуюся ткань, а остаток картофеля подсушивают при комнатной температуре. Далее проводят повторное взвешивание остатка растительной ткани. Степень поражения образца каждой повторности определяют по разнице в массе картофеля до заражения и через сутки инкубации с вычислением среднего процента. После этого сравнивают поражаемость исследуемого образца и сортов, принятых за эталон (например, Гатчинский – относительно устойчивый, и Столовый 19 – восприимчивый). Учет проводят по 9-балльной шкале, принятой в международном классификаторе СЭВ /6/:

9 баллов – 0 % – нет загнивания, очень высокая устойчивость образца;

7 баллов – 1-25 % – слабое загнивание, высокая устойчивость;

5 баллов – 26-50 % – среднее загнивание, средняя устойчивость;

3 балла – 51-75 % – сильное загнивание, низкая устойчивость;

1 балл – 76-100 % – очень сильное загнивание, очень низкая устойчивость.

Таким образом, образцы картофеля, пораженные на 5, 3 и 1 баллы, относят к восприимчивым, а на 9, 7 – к устойчивым.

При инфицировании дисков клубней методом нанесения капли суспензии в лабораторных условиях можно проводить массовую оценку устойчивости сортов и гибридов картофеля (на разных этапах селекционного процесса) в короткий срок (1-2 дня) в любое время года. При этом необходимо помнить, что при искусственном заражении большое значение имеют вирулентность штаммов, исходная концентрация бактериальной суспензии, стабильные внешние условия (температура и влажность воздуха). Сорта (гибриды), отобранные данным методом, дополнительно проверяют в полевых условиях на искусственном инфекционном фоне. Кроме того, можно применять искусственное заражение стеблей картофеля.