ГЛАВА 9. МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение селекционного материала проведено в питомниках коллекционного сортоизучения и конкурсного сортоиспытания. Опыты по изучению коллекционного сортоизучения проводились как в горной, так и в долинной зоне. Опыты были проведены в трех и четырехкратной повторности в двухрядковых  делянках. Посадка клубней в горной зоне была проведена в оптимальные агротехнические сроки - в средине мая. Клубни были высажены по схеме  60Х20 см, по 10 клубней в ряд. На каждой делянке по 20  клубней, а во всех трех делянках каждый сортообразец был высажен по 60 клубней. В питомнике конкурсного сортоиспытания  были высажены перспективные сортообразцы в трехкратной повторности, по схеме 65х25 см, на четырехрядковых делянках с длиной рядка 5 м. В каждом рядке было высажено по 20 клубней, а всего в делянке - 80 клубней. Во всех делянках было высажено по 240 клубней каждого сорта. Агротехника возделывания картофеля во всех питомниках состояла из проведения двукратного  мотыжения рядов, внесения  органоминеральных удобрений (N₁₀₀P₁₅₀K₈₀+ органика 10 т/га) и 8- 12 разового вегетационного полива. За 10 дней до уборки урожая, на опытном участке поливы были прекращены, а стебли скошены.  Во время вегетации растений дважды проводилась междурядная обработка, разовое мотыжение и окучивание рядов. Во всех питомниках были проведены фенологические наблюдения за ростом и развитием растений, в частности за всходами, бутонизацией  и цветением растений; было проведено морфологическое описание клонов в фазе массовой бутонизации и цветения растений, измерен рост кустов, проводился учет растений зараженных вирусными, грибными болезнями и бактериозами.  В фазе массового цветения и перед копкой урожая проводилась фитопрочистка посевов от больных кустов. Учет урожайности велся по опытным делянкам. Определялось количество клубней, их масса и урожайность сортов. При учете урожая подсчитывали количество товарных, семенных и нетоварных клубней, а также вес этих фракций. Путем умножения фактической продуктивности-г/растений на количество растений определялось урожайность сортообразцов на 1 га (расчётная).

Полевые опыты по размножению безвирусного семенного материала картофеля проводились в условиях Файзабадского и Джиргитальского районов, соответственно, на высоте 2300 и 2700 м над уровнем моря.

 

9.1. Методика получения и изучения оздоровленного материала

Метод оздоровления семенного материала включал следующие стадии: приготовление клубней для развития апикальной меристемы; проверка исходного материала методом иммуноферментного анализа;

Проведение термотерапии клубней.

Вырезание апикальной меристемы размером  150- 200 мкм проводилось  в микробиологической камере под бинокулярным микроскопом при увеличении x32.

Клубни выращивали в пробирках, в питательной среде по Мурасуга- Скуга (1962) с высоким содержанием кинетина и ауксина. Пробирки с тканевым материалом для выращивания размещали в лабораторных условиях с регулируемой температурой 23 – 25^oC, при влажности воздуха - 70% и освещенности 5-6 тысяч люкс в течение 16 часов. В дальнейшем, изолированную часть ткани верхушки, помещали в питательную среду, содержащую все компоненты, необходимые для роста и органогенеза картофеля.

Пробирочные оздоровленные растения образцов, полученных с Междунароным центром картофеля были высаживали в теплице в Джиргитальском районе при схеме посадки 45x20 см.

Высадку растений продолжили в марте  - апреле 1990г. - в теплице НПО

9.2. «Методика акклиматизации и  посадки пробирочных растений картофеля

Пробирочные растения и микроклубни  были посажены   на основе выполнения  следующих видов работ:

1. Добавление в пробирки с растениями 3-5 мл. воды для облегчения извлечения растений из пробирок (в течение 30 мин).
2. Осторожное извлечение растений при помощи специального проволочного крючка.
3. Промывание корешков растений в воде, и прополоскивание их в 0,5% растворе перманганата каля.
4. Прополоскивание корешков растений в дистиллированной воде.
5. Замачивание корешков растений в болтушке (раствор старого навоза, аммиачной селитры и  свежего навоза в соотношении 0.5кг. х 0.01кг. х 0.01кг. на один литр воды.
6. Посадка растений в тазики или в стаканчики, заполненные старым навозом, почвой и песком  (соотношение 1:0,5: 0,3) на глубине 0,5 см.
7. Поливы  через день при помощи специальной поливальной лейки.
8. Покрытие посадок полиэтиленовой пленкой при холодной погоде.
9. Контроль приживаемости растений через 5 дней.

 

В порядке эксперимента,  пробирочные растения в Джиргитальском районе были посажены в специализированном парнике, шириной 1метр, высотой насыпавшегося перепревшего навоза в 15 -17 см и произвольной длиной. Это оказалось очень удобным для прохождения акклиматизации растений перед пересадкой их в грунт. Растения были высажены по схеме 10х4см.

Нами также был испытан способ посадки пробирочных растений в грунт по схеме 10х4см., с последующей их пересадкой, а также посадка растений в грунт теплицы без их пересадки по схеме 45х15 -20см.

 

9.3. Методика посадки микроклубней картофеля

1. Для снятия периода покоя, свежеубранные микроклубни перед посадкой  необходимо замачить в растворе гиббереллина и тиомочевинной в течение 2-3 час. (если микроклубни имеют заметные глазом ростки, в замачивании нет необходимости).
2. Подготовка неглубоких рядков глубиной 10 см, шириной 12 см и междурядий 60см в марлевых домиках.
3. Заполнения рядов перепревшим навозом на 2-3 см.
4. Посадка клубней на расстоянии 10 –12 см. друг от друга.
5. Покрытие микроклубней перепревшим навозом на 2-3 см.
6. Регулярный полив посаженных рядков либо бороздовой водой, либо при помощи поливальной лейки (в течение 15-20 дней).

Мы также высаживали микроклубни картофеля в пластмассовые стаканчики, заполненные перепревшим навозом, а после всходов пересаживали их в почву. Это оказалось более удачным, чем посев их в рядках в почву.

 

9.4. Агротехника возделывания оздоровленного материала картофеля

Агротехника возделывания пробирочных растений, микроклубней, клубневого материала и семян картофеля, была почти одинакова. Она состояла из проведения вспашки, нарезки борозд, посева семян и посадки посадочного материала, проведения рыхления междурядий, внесения минеральных удобрений, обработки ядохимикатами против вредителей, проведения вегетационных поливов и   полевых прочисток, уборки урожая и закладки его на зимнее хранение. При вспашке вносили в почву из расчета 100кг/га сульфата калия и 300кг/га аммофоса. Азотные удобрения (аммиачную селитру) вносили в виде двух подкормок - во время вегетации растений, из расчета 400кг/га (в виде физического веса удобрений). В опытах, схема посадки была 45х20см. Во время вегетации было проведено 3-4 раза рыхления почвы, 8 - 10 вегетационных поливов. Растения дважды были обработаны дельтаметрином против насекомых, из расчета 0,2 литр на га.

Во время вегетации проведены все фенологические наблюдения в соответствии с методикой полевого опыта, фитосанитарные прочистки,   учет тлей - переносчиков инфекций. Уборка урожая сортов картофеля всех вариантов опыта, проводилась  в середине октября.

9.5. Методика проведение гибридизации картофеля

В условиях полевой экспериментальной станции в Джиргатальском районе на высоте 2700 метров над уровнем моря  в 2009 г. нами было проведено прямое и обратное скрещивание различных сортов картофеля для получения гибридов F₁. Для успешного проведения гибридизации после 15 час. дня проводилась кастрация цветков материнских растений (удаление тычиночной колонки цветков при помощи пинцета).

Затем, после 16 час. дня,  мы обрывали цветки отцовской родительской формы, удаляли  пестики и хранили их при комнатной температуре в чашках Петри, с 16 час. до 9 час. следующего дня. Утром в комнате при помощи пинцета или лабораторных игл, встряхивали тычиночные колонки с пыльниками и собирали пыльцу в стеклянные чашки. Собранной пыльцой опыляли кастрированные с вечера цветки, путем опускания рыльца пестика цветков в собранную массу пыльцы отцовской родительской формы.

После опыления, на цветоножку цветков, прикрепляли бумажную этикетку с указанием гибридной комбинации (материнская форма х отцовская  форма) и даты скрещивания. Количество опыленных цветков фиксировали  в учетную книгу гибридизации картофеля, учитывая дату.

Через 40-50 дней сформировавшиеся гибридные ягоды картофеля собирали, а полученные  гибридные семена (F₁) картофеля  в  2010 году были посеяны в условиях лаборатории, а также в теплице в условиях Файзабадского района, где мы  и получали клубни F₁ (севок).

Среди гибридов F₁С₀ (севок) были проведены клоновые и массовые отборы. В течение 2011-2012 гг. клубни гибридов F₁С₁ - F₁С₂ в виде выделенных клонов и массовых отборов были изучены в питомниках изучения гибридов первого и второго клубневого поколения  в условиях Джиргитальского района на высоте 2700 м н.ур. моря. Общее количество растений в селекционных питомниках ежегодно составляло 50 – 90 растений (популяции гибридных комбинаций и клонов).

Таким образом, впервые полученные нами гибриды картофеля в условиях нашей республики от внутривидового скрещивания (Solanum tuberosum L.), были изучены в следующих селекционных питомниках:

1. 2010 г.-  гибридные клубни (F₁C₀) – сеянцы (севок), выращенных  из ботанических семян (F₁C₀), с проведением клоновых и массовых отборов;
2. 2011г.- первое клубневое поколение – гибриды 1-го года с проведением клоновых и массовых отборов (F₁C₁);
3. 2012 г.- второе клубневое поколение - гибриды 2 года с проведением клоновых и массовых отборов (F₁C₂);