Для определения полевой устойчивости листьев и клубней к фитофторе используется сложная высоковирулентная и агрессивная раса, способная преодолеть защитное действие генов сверхчувствительности.

Заражение сеянцев фитофторозом. Сеянцы в фазе 3-4 настоящих листьев, растущие в пластмассовых кюветах или ящиках, обрабатывают (опрыскивают) суспензией в концентрации 10-12 или 20-25 конидий гриба в поле зрения микроскопа при увеличении в 120 раз в зависимости от степени устойчивости родительских форм.

После опрыскивания сеянцы накрывают пленкой для создания 100 %-ной влажности. Через 3 ч после заражения пленку снимают. Заражение сеянцев проводят  при оптимальных условиях температуры, влажности и освещения.

Первый учет поражения сеянцев проводят примерно на 5-9-й и на 15-й день в зависимости от развития болезни. Непораженные сеянцы, обладающие полевой устойчивостью, распикировывают в отдельные домики или в поле. Дальнейшая работа с ними ведется по обычной схеме селекционного процесса.

Определение полевой устойчивости листьев. Разработаны разные способы определения уровня полевой устойчивости к фитофторозу с использованием метода искусственного заражения. В селекционной работе для массовых анализов применяется метод заражения отделенных листьев, который позволяет получить достаточно достоверные результаты об уровне устойчивости сорта или гибрида.

Для заражения от каждого гибрида берут по 3 листа со среднего яруса и закладывают их во влажные камеры (кюветы) с увлажненной марлей и фильтровальной бумагой. Листья помещают нижней стороной наружу. На листе перед закладкой в кювет обычно оставляют по три доли (конечная и первая пара). Одновременно с испытуемыми растениями в кюветы закладывают листья контрольных растений – стандартных сортов, а также сортов и гибридов, хорошо изученных по полевой устойчивости, чтобы сделать правильный вывод о степени устойчивости того или иного образца. В качестве контроля на фитофтороустойчивость целесообразно использовать сорта с высокой, средней и низкой полевой устойчивостью.

Листья для заражения фитофторой берут от гибридов и стандартов, имеющих по вирусным болезням балл устойчивости не менее 5.

На каждую долю листа пастеровской или дозирующей иглой наносят каплю (0,1 мл) суспензии зооспорангиев гриба сложной высоковирулентной расы. Суспензию готовят смывом зооспорангиев с поверхности питательной среды 10-дневной культуры и с ломтиков картофеля 5-дневного возраста. Для заражения листьев селекционного материала применяют суспензию концентрации 20 конидий в поле зрения микроскопа при увеличении в 120 раз, что составляет примерно 30 тыс. зооспорангиев в 1 мл, а для оценки исходного материала – концентрации не менее 35 зооспорангиев при том же увеличении. Суспензию для выхода зооспор помещают на 2-4 часа в холодную камеру с температурой 4-8°. Для более быстрого выхода зооспор в случае приготовления суспензии используют дистиллированную воду с температурой 13-14°. Заражение листьев проводят к второй половине дня, после чего кюветы плотно накрывают стеклами для создания 100 %-ной влажности. Через 16 часов стекла снимают и капли суспензии с листьев удаляют. Для поддержания нормальной жизнедеятельности листьев и предотвращения их загнивания ежедневно стекла снимают и кюветы проветривают. Первый учет листьев делают через 3-4 суток после инокуляции, второй – через 1 сутки после предыдущего.

Устойчивость образца определяют по 9-балльной шкале. Расчет среднего балла но каждому испытуемому образцу проводят по результатам поражения 3 листьев (9 долей). По данным ВНИИКХ увеличение выборки с 3 листочков до 10 повышает достоверность результатов в 2-3 раза.

Шкала оценки устойчивости ботвы картофеля к фитофторозу.

 

Балл устойчивости	Степень поражения
9	Отсутствие некроза, спороношения: очень высокая степень устойчивости
7	Некроз, спороношение занимает менее ? площади листа: высокая устойчивость
5	Некроз, спороношение занимает от ? до ? площади листа: средняя устойчивость
3	Некроз, спороношение занимает от ? до ? площади листа: низкая устойчивость
1	Некроз, спороношение занимает более ? поверхности листа: очень низкая устойчивость

Определение полевой устойчивости клубней к фитофторозу.

Для оценки полевой устойчивости клубней используется модифицированная методика И.Задина. От каждого испытуемого образца берут 10 клубней без механических повреждений и визуальных признаков заболеваний. Перед заражением клубни моют и обсушивают. Для заражения целые клубни выдерживают в суспензии с концентрацией 20-25 зооспорангиев в поле зрения микроскопа при увеличении в 120 раз.

Каждый образец помещают в суспензию на 3-5 минут, а затем складывают в капроновые сетки и на сутки помещают во влажные камеры (кюветы с увлажненной фильтровальной бумагой), сверху закрывают пленкой. В течение опыта влажность поддерживается на уровне 80-90 %, a температура – 18-20°. По мере необходимости кюветы открывают на 1-2 часа с целью проветривания клубней.

Учет осуществляется через 15 дней от момента заражения, где учитывается сначала степень поражения поверхности клубня, в затем глубина проникновения гриба (некроза) путем разрезания клубня в продольном направлении. Средний балл устойчивости определяют с учетом названных показателей. Учет пораженности клубней проводится также по 9-балльной шкале.

Шкала оценки устойчивости клубней картофеля к фитофторозу.

 

Балл устойчивости	Степень поражения
9	Отсутствие поверхностного поражения и некроза: очень высокая устойчивость
7	Пораженная ткань занимает до 25 % поверхности и разреза клубней: высокая устойчивость
5	Пораженная ткань занимает от 25 до 50 % поверхности и разреза клубней: средняя устойчивость
3	Пораженная ткань занимает от 51 до 75 % поверхности и разреза клубней: низкая устойчивость
1	Пораженная ткань занимает свыше 75 % поверхности и разреза клубней: очень низкая устойчивость