АгроСборник.Ру

В основе метола лежит техника получения клеточных линий – "гибридом" – продуцентов антител, которое образуются путем слияния клеток миеломы мыши с клетками селезенки иммунизированных мышей. Перевиваемые линии клонированных гибридных клеток позволяют получать потенциально неограниченные количества гомогенных антител уникальной специфичности.

Гибридная клетка – клетка, образовавшаяся от слияния двух или большего числа соматических клеток in vitro. При слиянии происходят объединение клеточных мембран, протоплазмы, хромосомных наборов. Опухолевые миеломные клетки обладают способностью бесконечной пролиферации. Их интеграция с клетками селезенки иммунизированных мышей позволяет получить клоны размножающихся гибридов – антителопродуцентов. Клетки клона идентичны между собой и синтезируют химически идентичные молекулы моноклональных антител. Клетки миеломы передают гибридным клеткам способность к неограниченному росту.

Обычно для получения моноклональных антител методом "гибридом" на первом этапе проводят иммунизацию мышей антигеном – вирусом (внутрибрюшинно по 50 мкг вируса, эмульгированного в полном адъюванте Фрейнда, трижды с 2-недельным интервалом). Для слияния используют несекретирующую миеломную линию с клетками селезенки иммунизированных мышей. В качестве гибридизирующего агента используют полиэтиленгликоль (молекулярный вес 4000). После слияния клетки культивируют на полной среде Дульбекио и выделяют клоны, продуцирующие специфические антитела. После этого клетки клона (около 106) внутрибрюшинно вводят мышам. Через 20-12 дней собирают по 6-10 мл асцитической жидкости (титр не ниже 5х105), которые используют в ИФА. Клетки клонов реклонируют на мягком агаре и в дальнейшем используют для инъекций.

Добавить комментарий

Вы можете оставить свой комментарий авторизовавшись при помощи любой из представленный социальных сетей:

       


Защитный код
Обновить

Поделиться!

Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!

Написать в Facebook Поделиться ВКонтакте В Google Buzz Записать себе в LiveJournal Показать В Моем Мире В дневник на LI.RU Поделиться ссылкой в Моем Круге

Авторизация