АгроСборник.Ру

Для проведения работы необходимо иметь подходящее помещение, оборудованное стеллажами и столами. Температурные условия и освещение должны быть благоприятными для развития гриба. При отсутствии теплиц можно использовать подвальные помещения, соответственно оборудованные в отношении температурного и светового режимов.

При инокуляции температура в течение 12-16 часов должна быть 15-17°С. Последующее развитие гриба в тканях лучше идет при 18-19°С. Для нормального светового режима необходимо включать лампы дневного света на 12 ч. ежедневно, из расчета 2 лампы на 1 м2 рабочей площади. В летний период работу можно проводить на стеллажах под навесом, затемненном от прямых солнечных лучей и защищенном от ветра. Навесы в таких случаях лучше ориентировать на север. Для постановки же более глубоких научных исследований необходимы стабильные условия закрытых помещений.

Техника инфицирования растений одинакова как при определении рас у гриба, так и при выявлении устойчивости у сортообразцов картофеля к фитофторозу, с той лишь разницей, что в первом случав инокулированию подвергаются отдельные листья растений сортов-дифференциаторов, а во втором – листья испытуемых образцов. Для работы на открытых стеллажах более пригодны листочки от растений, выращенных в поле, нежели в теплице. Для заражения необходимо предварительно провести подготовительную работу. Описанная ниже техника проведения работ, предложенная ВИЗР, нашла широкое применение в системе научных учреждений.

На столах (стеллажах) размещают стекла размером 40х50 см, 40х60 см и более, покрывают каждое стекло слоем фильтровальной бумаги, а затем споем марли. Концы марли с двух сторон опускает в кюветы с водой (для поддержания увлажнения листа в норме, при которой не происходит их загнивания). Заранее приготовляет по размерам стекол фанерные ящики, выстланные изнутри оберточной или фильтровальной бумагой. Бумага изнутри крепится кнопками. Перед использованием ящики обильно поливают внутри водой до полного смачивания бумаги и опрокидывают, давая стечь лишней воде. Работу можно проводить с отделенными листьями в любой фазе развития растений, но до появления заболевания в поле во избежание наслоения полевой инфекции и искажения полученных данных. Сбор листьев нужно проводить под вечер. Лучше брать листья среднего яруса, считая вниз от вершины стебля, с хорошо сформировавшейся листовой пластинкой. Для каждой испытываемой расы или для выявления устойчивости сортообразца к той или иной расе берут по два листа. Перед раскладкой листьев стекла еще раз обильно смачивают водой. Потом вставляют каждый лист черешком в отверстия квадратиков из фильтровальной бумаги – этикетку, на которой в правом верхнем углу пишут номер дифференциатора или образца. Собранные листья каждого образца раскладывают нижней стороной вверх в один ряд по горизонтали на приготовленные стекла. При использовании стекол больших размеров на каждом стекле можно уложить 10-15 рядов листьев по 15-20 штук в ряде. Для контроля в каждую инокулируемую партию листьев на стекла дополнительно кладут по два листа заведомо сильно восприимчивого сорта.

Инокулюм приготовляют заранее. Для получения инокулюма возбудитель должен быть предварительно размножен в нужном количестве в соответствии с масштабами проводимой работы. Размножение проводят на ломтиках клубня восприимчивого сорта. Для приготовления взвеси (смыва культуры) используют дистиллированную, дождевую иди мягкую колодезную воду; водопроводные хлорированные воды не пригодны. Свежая культура возбудителя (4-6 дней) с высокой жизнедеятельностью (хорошо развитым мицелием и выполненными конидиями) дает быстрый выход зооспор из конидий. Активность выхода может быть повышена при выдерживании взвеси при температуре 10-12°С в течение 20-30 мин.

После приготовления взвеси приступают к заражению листьев. Для этого пипеткой с сильно оттянутым концом наносят по 2 капли взвеси на каждую дольку листа, располагая каждую из них сбоку от центральной жилки. Капли при этом должны быть нескатывающиеся. Заражение листьев всех повторностей необходимо проводить одновременно одной и той же суспензией. При массовом заражение одной и той же взвесью инокулюма ее необходимо приготовить сразу в нужном объеме. При работе суспензию необходимо все время взбалтывать. Для обеспечения равномерности густоты взвеси рекомендуется перед заражением приготовленную взвесь сразу же разделить на 2-3 порции и использовать каждую по окончании предыдущей.

После нанесения капель суспензии и проверки соответствия и правильности этикеток, стекла с листочками осторожно, чтобы не стряхнуть капли, помещают в условия влажной камеры на одни сутки.

Через сутки влажные камеры удаляют, и стекла оставляет стоять открытыми на 4-5 дней, до проявления некротических пятен, после чего делают предварительную запись результатов заражения. С развитием некротических пятен стекла с зараженными листочками снова помещают в условия влажной камеры на сутки – до появления спороношения, после чего производят учет результатов заражения. Образование спороношения контролируется под лупой или микроскопом. При получении сомнительных, нечетких результатов производят повторное заражение.

После записи результатов зараженные листья вместе с фильтровальной бумагой сжигают, а ящики, пробирки, пипетки и марлю моют под краном, с мылом, водопроводной водой. Марлю дополнительно кипятят. После каждого опыта столы (стеллажи) также моют, производят тщательную уборку помещения.

Добавить комментарий

Вы можете оставить свой комментарий авторизовавшись при помощи любой из представленный социальных сетей:

       


Защитный код
Обновить

Поделиться!

Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!

Написать в Facebook Поделиться ВКонтакте В Google Buzz Записать себе в LiveJournal Показать В Моем Мире В дневник на LI.RU Поделиться ссылкой в Моем Круге

Авторизация