АгроСборник.Ру

Для получения ооспор в листовой ткани растения-хозяина используют изоляты А1 и А2 типов совместимости с одинаковой скоростью роста. Поэтому предварительно определяют скорость роста мицелия каждого изолята на долях листьев тех сортов и видов пасленовых, которые планируют использовать в работе.

Для этого доли листьев раскладывают на предметные стекла во влажные камеры (чашки Петри или кюветы с влажной фильтровальной бумагой, помещенные в полиэтиленовые пакеты). Из 7-10-суточной культуры гриба, выращенной на ржано-овощной среде, готовят зооспоровую суспензию (нагрузка 5-6 конидий в поле зрения микроскопа) изолятов А1 и А2 типов совместимости. Зооспоровой суспензией пропитывают 5-10 рыхлоскатанных ватных шариков (0,3-0,5 см в диаметре) и в центр каждой доли листа помещают по одному шарику. После инокуляции доли листьев инкубируют при 18-20 °С в течение 6-7 суток, затем измеряют радиусы инфекционных пятен вдоль жилок. Для получения ооспор на апикальный конец каждой доли листа кладут ватный шарик, пропитанный зооспоровой суспензией изолята А1 типа совместимости, на дистальный – такой же шарик с зооспорами А2 типа совместимости. Инокулированные листья инкубируют при 18-20 °С и 12-16-часовом световом дне, избегая излишней влажности, чтобы листья не заселялись сапрофитными микроорганизмами. Через 10-12 суток ткань листьев мацерируется и под микроскопом отмечают наличие или отсутствие ооспор. Как правило, ооспоры образуются в зоне смыкания мицелия изолятор А1 и А2 типов совместимости, вдоль средней жилки доли листа. Листья с ооспорами помещают в дистиллированную воду и размельчают в микроразмельчителе тканей РТ-2 в течение 2 мин. Полученную суспензию протирают через сито с диаметром отверстий 44 мкм. Ооспоры отделяют от листовой ткани центрифугированием. Для этого исходную суспензию разводят дистиллированной водой и центрифугируют при 2500 об/мин в течение 5 мин. При этом ооспоры оседают на дно центрифужных стаканчиков. Надосадочную жидкость удаляют пипеткой, а к осадку вновь добавляют дистиллированную воду. Центрифугирование повторяют 5-6 раз.

Добавить комментарий

Вы можете оставить свой комментарий авторизовавшись при помощи любой из представленный социальных сетей:

       


Защитный код
Обновить

Поделиться!

Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!

Написать в Facebook Поделиться ВКонтакте В Google Buzz Записать себе в LiveJournal Показать В Моем Мире В дневник на LI.RU Поделиться ссылкой в Моем Круге

Авторизация

Сотрудничество|Обмен ссылками|Связаться с нами

АгроСборник.Ру © 2011-2017. Все Права Защищены.


Яндекс.Метрика