АгроСборник.Ру

Почву каждого варианта тщательно перемешивают и используют по 50 г из каждой пробы. К отобранному субобразцу почвы добавляют 50 мл дистиллированной воды и перемешивают до образования гомогенной суспензии. Для ограничения роста сапрофитных грибов, находящихся в почве, в суспензию вносят нистатин или беномил из расчета 50 мкг/мл суспензии. Приготовленную таким образом почвенную суспензию наносят на ломтики здоровых клубней. Появление на поверхности ломтиков спорулирующего мицелия фитофторы указывает на присутствие в почве конидий, зооспор или мицелия, то есть бесполых структур патогена. В том случае, если данный образец почвы инфицирован ооспорами и возникает необходимость именно в выделении изолятов гриба, развивающегося из проросших ооспор (половая популяция), то необходимо проведение дополнительных процедур. Субобразцы почвы помещают в морозильную камеру при 10-15 °С на 18-24 ч с тем, чтобы избавиться от бесполых структур гриба (ооспоры остаются жизнеспособными). Приготовленную после этого суспензию выдерживают при 15-20 °С в течение 5-10 суток для стимуляции прорастания ооспор, а затем наносят на ломтики.

Для каждого образца почвы (варианта) готовят по 20-30 свеженарезанных ломтиков из здоровых, предварительно простерилизованных спиртом клубней восприимчивого сорта картофеля. Ломтики укладывают в стерильные влажные камеры (приготовление влажных камер в приложении 2). На каждый ломтик наносят примерно 0,5-1,0 г почвенной суспензии и шпателем распределяют ее по всей поверхности ломтика. Ломтики инкубируют в темноте при 15-18 °С. Если в почве присутствуют жизнеспособные структуры патогена, то спорулирующий мицелий появляется обычно на поверхности ломтиков на 5-8 сутки. Для выделения гриба в чистую культуру мицелий переносят препаровальной иглой в боковые надрезы на здоровых ломтиках, заложенных в стерильные влажные камеры (чашки Петри), которые инкубируют при 15-20 °С. Через 3-4 суток образовавшийся мицелий с поверхности ломтиков отсевают на питательную среду с антибиотиками.

Методом нанесения почвенной суспензии на ломтики определяют также относительную степень заспоренности почвы в производственных или опытных посадках картофеля. Для этого на 5-8 сутки инкубации в каждом варианте подсчитывают число ломтиков со спороношением гриба или определяют площадь ломтиков, занятую спорулирующим мицелием. Степень заспоренности почвы может служить показателем эффективности мероприятий по защите клубней картофеля от фитофтороза.

Добавить комментарий

Вы можете оставить свой комментарий авторизовавшись при помощи любой из представленный социальных сетей:

       


Защитный код
Обновить

Поделиться!

Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!

Написать в Facebook Поделиться ВКонтакте В Google Buzz Записать себе в LiveJournal Показать В Моем Мире В дневник на LI.RU Поделиться ссылкой в Моем Круге

Авторизация

Сотрудничество|Обмен ссылками|Связаться с нами

АгроСборник.Ру © 2011-2017. Все Права Защищены.


Яндекс.Метрика