АгроСборник.Ру

1. Среда Кельмана (Kelman, 1954)

Эта среда используется главным образом для выделения P. solanacearum из растительного материала. Добавление в эту среду 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (ТТХ) делает её пригодной и для выделения из почвы, но чувствительность её в этом случае не очень высокая (млн. клеток/мл) из-за недостаточной селективности. Состав среды: г/л, глюкоза – 5, пептон – 10, гидролизат казеина – 1, 1 %-ный водный раствор ТТХ – 5 мл. ТТХ стерилизуется отдельно в виде 10 % раствора (5 мин. 1 атм.) и добавляется в среду перед посевом (в расплавленный и остуженный до 40-50° агар). Глюкоза в среде может быть заменена глицерином.

Колонии P. solanacearum на этой среде имеют следующий вид: кремово-белые, слизистые, растекающиеся со слабо приподнятым розоватым центром (окраска может быть ярче – до оранжево-красной) и большими белыми краями. Колонии редко бывают правильной формы, гораздо чаще имеют неровные края, а розовый центр имеет окраску по спирали. Такой вид колоний характерен для вирулентных форм. Невирулентные формы на этой среде маслянистые, кремово-белые в начале развития, затем красные с небольшими голубоватыми краями.

Для выделения из растительного материала возбудителя бурой гнили можно использовать также обычные питательные среды, применяемые для выделения грамотрицательных фитопатогенных бактерий, а именно: картофельный агар с генциан-виолетом, пептонно-дрожжевую и сахарозо-пептонную среды, а также среды с 1-тирозином.

2. Картофельный агар с генциан-виолетом

На 1 литр дистиллированной воды берут 200 грамм картофеля, очищенного и мелко нарезанного, и кипятят 20 мин., бульон отфильтровывают через два слоя марли и доводят объем до первоначального. Добавляют 20 г агара, расплавляют, вновь фильтруют и после этого вносят в среду 3 мл 0,1 % раствора генциан-виолета.

3. Пептонно-дрожжевая среда, г/л

Дрожжевой экстракт – 5 г, пептон – 10 г, агар – 20 г.

4. Сахарозо-пептонная среда, г/л

Сахароза – 20, пептон – 5, двухзамещенный фосфорнокислый калий – 0,5, сернокислый магний – 0,25, агар – 20.

На этой среде виды P. solanacearum образуют кремово-белые колонии, плоские, округлые, расплывчатые с неровными краями, слизистые, при просмотре под микроскопом видны спиралевидные завитки.

Колонии, отсеянные со среды 2, 3, 4, проверяют на среде Кельмана с ТТХ или на средах с тирозином.

5. Среды с 1-тирозииом, г/л

5.1.: пептон – 10, гидролизат казеина – 1, глюкоза – 5, 1-тирозин – 1, агар – 20.

5.2.: к среде 4 прибавляют 1 г L-тирозина.

На средах с тирозином виды P. solanacearum выделяют коричневый пигмент разной интенсивности.

6 .Среда Харриса (Harris. 1976)

Эта среда служит для выделения из почвы и ризосферы, так как имеет высокую селективность. Харрис для повышения избирательности среды, для выделения искомого возбудителя ввел в среду Кельмана актидион (0,2 г/л) и неомицин (0,2 г/л) и повысил концентрацию ТТХ до 4 г/л. В такой модификации чувствительность среды при выделении из почвы повысилась до 100-1000 клеток/мл. На этой среде P. solanacearum образует колонии интенсивно красные, меньших размеров, чем на среде Кельмана, но красная окраска также расположена по спирали.

7. Среда Гранда и Секвейра (Granada, Sequeira, 1975)

Предназначена также для выделения из почвы и ризосферы. К основной среде Кельмана добавляют: кристалл-виолет – 50 мг/л, мертиолят – 0,005 %, полимиксин В сульфат – 100 мг/л, тиротрицин – 20 мг/л и актидион – 50 мг/л.

Среда Капплес и Кельмана (Cuppels, Kelman, 1974)

К 300 мл кипящей воды добавляют 4,5 мл 1H раствора едкого натрия, 3 мл 10 % раствора хлористого кальция, 2 г агара, 1 г азотнокислого натрия и 1 мл 0,075 % водного раствора генциан-виолета. Кипятят, помешивая 1-3 минуты, и постепенно добавляют 15 г полипектата натрия и 200 мл кипящей воды. После стерилизации среду разливают в чашки, подсушивают 48 час. и затем проводят высев анализируемого материала. На этой среде P. solanacearum образует небольшие колонии в точечных углублениях. Виды рода Erwinia на этой среде образуют большие зоны разжижения пектата.

9. Среда Карганилла и Цудденхагена (Karganilla, Buddenhagen, 1972)

Основной состав, г/л: маннит – 2,5, сернокислый магний – 0,1, L-глутаминовая кислота – 1, раствор металлов – 0,05 мл, 1 % -ный раствор ТТХ – 5 мл, агар – 20.

Раствор металлов: %, сернокислый марганец – 0,616, сернокислый цинк – 1,1, сернокислая медь – 0,0286, сернокислый кальций – 0,0286, фосфорная кислота – 0,01144, калий йодистый – 0,0000128, сернокислое железо аммоний – 0,176. К этой среде добавляют также различные антибиотики, мг/л: бацитрацин – 50, хлормицетин – 5, пенициллин – 1, тиротрицин – 20, ванкомицин – 10, циклогексимид – 50, каптан – 10. Раствор ТТХ, металлов и антибиотиков добавляют в расплавленную и охлажденную основную среду.

10. Среда Хусейна и Кельмана (Husain, Kelman, 1958)

Основной состав: на 800 мл воды, сахароза – 20 г, дрожжевой экстракт – 1 г, гидролизат казеина – 1 г, фосфатный буфер – 10 мл, аммоний сернокислый – 10 мл, магний сернокислый – 10 мл, цинк сернокислый – 5 мл, цитрат железа – 1 мл, марганец сернокислый – 1 мл.

Приготовление растворов: фосфатный буфер – калий фосфорнокислый однозамещенный – 117,7 г/л, калий фосфорнокислый двухзамещенный – 44,1 г/л, сернокислый аммоний – 66 г/500 мл, магний сернокислый – 20 г/500 мл, цинк сернокислый – 0,82 г/500 мл, цитрат железа – 1,49 г + лимонная кислота 0,958 г/500 мл и марганец сернокислый – 0,77 г на 500 мл дистиллированной воды. Агар в составе среды – 20 г.

11. Среда Несмитх и Дженкинс (Nesmith, Jenkins, 1979)

Основной состав: глюкоза – 4 г, пептон – 10 г, дрожжевой экстракт – 1 г, гидролизат казеина – 1 г, агар – 18-20 г. К этой среде прибавляют растворы солей, данные в среде 10, а также следующие компоненты: пенициллин – 1, тиротрицин – 20, хлоромицетин – 5, ТТХ – 500, полимиксин В – 100, ванкомицин – 10, бацитрацин – 50, беномил – 500, хлоронэб – 100, циклогексимид – 50, пентахлорнитробензин – 30, пимарицин – 20, дихлоран – 100. Все компоненты даны в мг/л среды.

Авторы считают, что эта среда является наиболее селективной по сравнению с другими средами и имеет высокую чувствительность (100 колоний на 1 грамм почвы).

Добавить комментарий

Вы можете оставить свой комментарий авторизовавшись при помощи любой из представленный социальных сетей:

       


Защитный код
Обновить

Поделиться!

Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!

Написать в Facebook Поделиться ВКонтакте В Google Buzz Записать себе в LiveJournal Показать В Моем Мире В дневник на LI.RU Поделиться ссылкой в Моем Круге

Авторизация