АгроСборник.Ру

По нашему мнению, наиболее простой и надежный метод получения моноспоровых изолятов – использование специальной насадки, укрепленной на объективе микроскопа [3]. Для этого готовят конидиальную или зооспоровую суспензию (1-5 х 103 спор/мл) исходного изолята, наносят 1...3 капли на поверхность 1,5...2 %-ного водного агара и равномерно распределяют стеклянным шпателем в чашках Петри слоем 2 мм. Через 14...16 часов открытые чашки просматривают под микроскопом с помощью укрепленной на объективе насадки. При обнаружении одной проросшей споры в центре поля зрения объектив с насадкой опускают до дна чашки Петри и вырезают цилиндрик агара, содержащий спору. Поднимая тубус и отводя объектив в сторону, вырезанный кусочек агара с помощью резиновой груши выдувают непосредственно в боковой надрез на свежем ломтике клубня. После извлечения каждой споры насадку стерилизуют спиртом. Приживаемость конидий или зооспор в ломтиках картофеля составляет от 6 до 60 % в зависимости от исходного изолята.

Монооспоровые изоляты получают таким же способом. В чашках Петри с ооспорами в зоне смыкания изолятов А1 и А2 т.с. вырезают агаровые блоки, которые в небольшом количестве стерильной или дистиллированной воды (25...30 мл) гомогенизируют в микроизмельчителе тканей. Если суспензия слишком густая, ее дополнительно разбавляют водой и разливают в стерильные чашки Петри, которые затем инкубируют в течение 5...7 дней при 15...18°С для инициации прорастания ооспор. Затем две-три капли суспензии (в зависимости от концентрации ооспор) наносят на поверхность 1,0...1,5 %-ного агара в чашках Петри и равномерно распределяют шпателем. Непосредственно после нанесения суспензии чашки просматривают под микроскопом и проросшие ооспоры вырезают, как описано выше, с помощью металлической насадки на объективе микроскопа. Поскольку ооспоры прорастают неодновременно, то чашки дополнительно выдерживают при 15...18°С до 5...7 дней и вырезают вновь проросшие ооспоры. При этом во время инкубации на поверхность агара через каждые два дня добавляют по две-три капли стерильной воды, необходимой для прорастания ооспор. При выдерживании чашек Петри с проросшими ооспорами при температуре 8...10°С через несколько часов конидии высвобождают зооспоры. В этом случае можно выделять монозооспоровые изоляты гриба.

Предлагаемые методические приемы изоляции возбудителя фитофтороза в чистую культуру позволят фитопатологам, микологам, иммунологам повысить эффективность исследований, избавят специалистов службы защиты растений от ошибок при диагностике патогена и разработке адекватных защитных мероприятий.

Добавить комментарий

Вы можете оставить свой комментарий авторизовавшись при помощи любой из представленный социальных сетей:

       


Защитный код
Обновить

Поделиться!

Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!

Написать в Facebook Поделиться ВКонтакте В Google Buzz Записать себе в LiveJournal Показать В Моем Мире В дневник на LI.RU Поделиться ссылкой в Моем Круге

Авторизация