АгроСборник.Ру

1. Ржано-овощная среда

 

Состав: сок овощной или томатный – 50 мл,

рожь – 100 г,

СаСОз – 5 г,

сахароза – 5 г,

агар-агар – 17 г,

вода дистиллированная – 950 мл.

Приготовление среды: 100 г ржи помещают в колбу из термостойкого стекла, заливают 500 мл дистиллированной воды, запаривают в автоклаве под текучим паром при 0,5 атм 50 мин. После охлаждения содержимое колбы фильтруют через два слоя марли. В 450 мл дистиллированной воды расплавляют 17 г агар-агара в водяной бане, затем смешивают ржаную вытяжку с отфильтрованным агаром, добавляют сок, сахарозу и СаСО3 и доводят объем среда до 1 л дистиллированной водой. Среду разливают в колбы и стерилизуют в автоклава при 1 атм 40 мин.

 

2. Овощная среда

 

Состав: сок овощной или томатный – 100 мл,

СаСО3 –5 г,

агар-агар – 17 г,

вода дистиллированная – 900 мл.

Приготовление среды: 17 г агар-агара заливают 900 мл дистиллированной воды, расплавляют в водяной бане, затем фильтруют через два слоя марли и добавляют сок, СаСО3. Готовую смесь тщательно перемешивают, доводят объем среды до 1 л дистиллированной водой, разливают в колбы и стерилизуют в автоклаве при 1 атм. 40 мин.

 

3. Овсяная среда

 

Состав: овсяная крупа – 100 г,

агар-агар – 17 г,

дистиллированная вода – 1000 мл.

Приготовление: 100 г овсяной крупы (или 50 г овсяных хлопьев) заливают 600 мл дистиллированной воды, помещают в водяную баню и выдерживают 40 мин (с момента закипания), затем фильтруют через два слоя марли. На водяной бане в 400 мл дистиллированной воды расплавляют 17 г агар-агара, после чего овсяную вытяжку смешивают с отфильтрованным агаром, доводят обьем среды до 1 л, разливают в колбы или в биологические пробирки (по 20 мл в каждую) и стерилизуют 40 мин при давлении пара в 1 атм. После стерилизации среду скашивают, размещая пробирки под углом 35-40° так, чтобы верхний уровень среды не касался пробки.

4. Ржаная среда

 

Состав: рожь – 100 г,

сахароза – 5 г,

агар-агар – 17 г,

вода дистиллированная – 1000 мл.

Среду готовят так же, как и ржано-овощную, но без добавления сока и СаСО3.

ndent'?c;X?? ?ht:normal'>Для заражения листовых дисков используют разные методы. Если при выделении гриба из ботвы или клубней на поверхности ломтика развивается "чистый" спорулирующий мицелий (без сопутствующей микрофлоры), то его используют для инокуляции листовых дисков. Перед инокуляцией в центр каждого диска пипеткой-дозатором наносят по капле дистиллированной воды (10 мкл). Затем в каждую каплю помещают по кусочку мицелия (на кончике препаровальной иглы). Если изолят выделен в чистую культуру на питательные среды, то для инокуляции готовят конидиальную суспензию, смывая конидии с питательной среды дистиллированной водой. Концентрацию суспензии доводят до 25000 конидий/мл. Приготовленную суспензию помещают в холодильник при 4-5 °С для стимуляции выхода зооспор и затем по капле (10 мкл) наносят в центр дисков.

 

Оценку чувствительности (резистентности) природных популяций проводят также без выделения патогена на ломтики картофеля или в чистую культуру. Для этого отобранные в поле образцы пораженной ботвы с инфекционными пятнами 1-2-дневного возраста (загнивание растительной ткани отсутствует) помещают на сутки во влажные камеры при 15-20 °С для стимуляции конидиального спороношення. Затем конидии с интенсивно спорулирующих пятен смывают дистиллированной водой и после выхода зооспор полученные суспензии (концентрация 25000 конидий/мл) пипеткой-дозатором наносят на листовые диски. Однако следует учитывать, что оценка резистентности полевых популяций возбудителя фитофтороза в большей степени качественная, чем количественная. Поскольку одно инфекционное пятно может продуцировать чувствительные и резистентные конидии в разном соотношении, то в этом случае оценивают резистентность смешанного инокулюма. Известно, что содержание в смешанной популяции даже 10 % резистентных конидий дает на листовых дисках реакцию резистентности к ридомилу, при наличии 1 % таких конидий эта реакция наблюдается не всегда.

Чашки с листовыми дисками инкубируют при 15-18 °С с 12-16-часовым световым днем в течение 6-9 суток. Учет развития болезни на листовых дисках проводят по 6-балльной шкале: 0 – нет видимых симптомов; 1 – некрозы, 2, 3, 4 и 5 – соответственно, 5, 5-20, 20-50 и более 50 % площади диска занято спорулирующим поражением.

Для дифференциации полевых изолятов по чувствительности к ридомилу можно использовать не все рекомендованные концентрации фунгицида, а только следующие; 0 (контроль), 1 мкг д.в./мл (концентрация, близкая к минимальной ингибирующей дозе), 100 мкг д.в./мл. Отсутствие спороношения на листовых дисках при концентрации 1 мкг д.в./мл дает основание считать изолят чувствительным к ридомилу (баллы 0, 1), а развитие спороношения на дисках при концентрации ридомила 100 мкг д.в./мл указывает, что изолят резистентный (баллы 2-5). При наличии спороношения на дисках при концентрации 1 мкг д.в./мл изолят можно отнести к промежуточному типу.

Для определения среднесмертельной концентрации (СК50, концентрация фунгицида, подавляющая развитие болезни на 50 %) и уровня (фактора) резистентности используют всю серию концентраций фунгицида. В каждый опыт включают заведомо чувствительный изолят или имеют данные по СК50 для чувствительных изолятов. СК50 определяют графически на миллиметровой бумаге. На оси абсцисс откладывают концентрации фунгицида, на оси ординат – процент дисков со спороношением гриба или степень споруляции на листовых дисках при каждой концентрации фунгицида, выраженную в процентах к контролю (нулевая концентрация). По опытным данным на графике строят кривые для каждого изолята. Из точки на кривой, расположенной напротив отметки 50 % на оси ординат, опускают перпендикуляр на ось абсцисс. Полученное значение соответствует значению СК50 для данного фунгицида и данного изолята гриба. Уровень резистентности рассчитывают делением значения СК50 резистентного изолята на значение СК50 чувствительного изолята.

Добавить комментарий

Вы можете оставить свой комментарий авторизовавшись при помощи любой из представленный социальных сетей:

       


Защитный код
Обновить

Поделиться!

Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!

Написать в Facebook Поделиться ВКонтакте В Google Buzz Записать себе в LiveJournal Показать В Моем Мире В дневник на LI.RU Поделиться ссылкой в Моем Круге

Авторизация

Сотрудничество|Обмен ссылками|Связаться с нами

АгроСборник.Ру © 2011-2017. Все Права Защищены.


Яндекс.Метрика