Звезда не активнаЗвезда не активнаЗвезда не активнаЗвезда не активнаЗвезда не активна
 

Почву каждого варианта тщательно перемешивают и используют по 50 г из каждой пробы. К отобранному субобразцу почвы добавляют 50 мл дистиллированной воды и перемешивают до образования гомогенной суспензии. Для ограничения роста сапрофитных грибов, находящихся в почве, в суспензию вносят нистатин или беномил из расчета 50 мкг/мл суспензии. Приготовленную таким образом почвенную суспензию наносят на ломтики здоровых клубней. Появление на поверхности ломтиков спорулирующего мицелия фитофторы указывает на присутствие в почве конидий, зооспор или мицелия, то есть бесполых структур патогена. В том случае, если данный образец почвы инфицирован ооспорами и возникает необходимость именно в выделении изолятов гриба, развивающегося из проросших ооспор (половая популяция), то необходимо проведение дополнительных процедур. Субобразцы почвы помещают в морозильную камеру при 10-15 °С на 18-24 ч с тем, чтобы избавиться от бесполых структур гриба (ооспоры остаются жизнеспособными). Приготовленную после этого суспензию выдерживают при 15-20 °С в течение 5-10 суток для стимуляции прорастания ооспор, а затем наносят на ломтики.

Для каждого образца почвы (варианта) готовят по 20-30 свеженарезанных ломтиков из здоровых, предварительно простерилизованных спиртом клубней восприимчивого сорта картофеля. Ломтики укладывают в стерильные влажные камеры (приготовление влажных камер в приложении 2). На каждый ломтик наносят примерно 0,5-1,0 г почвенной суспензии и шпателем распределяют ее по всей поверхности ломтика. Ломтики инкубируют в темноте при 15-18 °С. Если в почве присутствуют жизнеспособные структуры патогена, то спорулирующий мицелий появляется обычно на поверхности ломтиков на 5-8 сутки. Для выделения гриба в чистую культуру мицелий переносят препаровальной иглой в боковые надрезы на здоровых ломтиках, заложенных в стерильные влажные камеры (чашки Петри), которые инкубируют при 15-20 °С. Через 3-4 суток образовавшийся мицелий с поверхности ломтиков отсевают на питательную среду с антибиотиками.

Методом нанесения почвенной суспензии на ломтики определяют также относительную степень заспоренности почвы в производственных или опытных посадках картофеля. Для этого на 5-8 сутки инкубации в каждом варианте подсчитывают число ломтиков со спороношением гриба или определяют площадь ломтиков, занятую спорулирующим мицелием. Степень заспоренности почвы может служить показателем эффективности мероприятий по защите клубней картофеля от фитофтороза.