АгроСборник.Ру

С целью повышения чувствительности при диагностике вирусов и их идентификации предложен метод антигенно-активных пленок-подложек, известный впоследствии как метод иммуносорбентной электронной микроскопии (ИСЭМ). Суть метода заключается в следующем. Сетку пленкой вниз помещают на коплю антисыворотки, специфичной к вирусу, присутствующему в суспензии, на 30-40 с. Затем сыворотку отсасывают фильтровальной бумагой на краю сетки так, чтобы на пленке оставались следы влаги и затем сетку переносят на каплю сока растения, содержащего вирус. Далее сетку переносят на каплю контрастера, после чего капелькой вниз на фильтровальную бумагу для отсасывания избытка жидкости. Метод был апробирован с целью диагностики мозаичных вирусов X, S, M, Y. Были выявлены преимущества метода ИСЭМ, а именно:

- более высокая чувствительность, позволяющая определять вирус при малых концентрациях в тканях растений;

- увеличение концентрации вирусных частиц и более равномерное их распределение по поверхности пленки, что, очевидно, обусловлено повышением адсорбционной способности сенсибилизированной сывороткой пленки-подложки;

- в случае смешанных инфекций возможна дифференциальная диагностика вирусных частиц, благодаря хорошо видимому покрытию вирусных частиц гомологичными антителами.

К.С.Деррик наносил на сетку с пленкой-подложкой каплю антисыворотки к YВК, разведенной дистиллированной водой 1:50, и высушивал на воздухе 1 ч. Затем сетку помещали на каплю экстракта табака, инфицированного YВК, смешанного с нейтральным фосфатным буфером. Через 10 мин сетки промывали в течение 5 мин 0,15 М раствором NaCl и трижды в дистиллированной воде (по 1 мин). Частицы YВК на пленке с сывороткой были обнаружены при разведении сока 1:1024. На сетках с пленкой, покрытой нормальной сывороткой, частицы обнаружены при разведении сока 1:128. В последствии метод ИСЭМ использовался для диагностики ВСЛК и других вирусов.

Добавить комментарий

Вы можете оставить свой комментарий авторизовавшись при помощи любой из представленный социальных сетей:

       


Защитный код
Обновить

Поделиться!

Понравилась статья? Расскажите о ней знакомым или оставьте комментарий!

Написать в Facebook Поделиться ВКонтакте В Google Buzz Записать себе в LiveJournal Показать В Моем Мире В дневник на LI.RU Поделиться ссылкой в Моем Круге

Авторизация